酶標(biāo)測(cè)定儀檢測(cè)生鮮乳中三聚氰胺殘留的步驟
作者：admin 時(shí)間：2021-05-19 02:08:03 點(diǎn)擊次數(shù):4777
酶聯(lián)吸附法測(cè)定生鮮乳中三聚氰胺殘留量的方法。用提取液將樣品中三聚氰胺均質(zhì)振蕩提取。首先將三聚氰胺酶標(biāo)記物、樣品提取液和標(biāo)準(zhǔn)品加入涂有三聚氰胺抗體的微孔開始反應(yīng)。在30分鐘的孵育過程中，樣品提取液中的三聚氰胺與三聚氰胺酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)，與微孔中的三聚氰胺抗體結(jié)合。孵育30分鐘后，微孔中所有未結(jié)合的三聚氰胺和三聚氰胺酶標(biāo)記物都被沖洗掉。用去離子水洗滌后，在每孔中加入一種清晰的底物溶液，結(jié)合酶標(biāo)儀將無色底物轉(zhuǎn)化為藍(lán)色物質(zhì)。孵育30分鐘后停止反應(yīng)，根據(jù)各孔顏色深度讀取數(shù)據(jù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)顏色，得到樣品中三聚氰胺的濃度值。
一、酶標(biāo)儀檢測(cè)原料奶中三聚氰胺需要準(zhǔn)備的材料:
1. 蒸餾水或去離子水
2. 可以吸收50ul和100ul的移液器和吸頭
3.4000轉(zhuǎn)離心
4. 吸水性紙或同等的吸水性材料
5. 450海里標(biāo)
6. 計(jì)時(shí)器
7. 20mM PBS:自備
8. 清洗液:需自備
二、酶標(biāo)儀檢測(cè)原料奶中三聚氰胺試劑的制備:
1. 20mM PBS: 0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水使體積至1000ml
2. 洗滌溶液:0.62g na2po4·2H2O+5.73g Na2HPO4·12H2O+9g NaCl，蒸餾水到定容1000ml。+0.5ml土壤溫度20
三、酶標(biāo)儀檢測(cè)原料奶中三聚氰胺樣品的預(yù)處理:原料奶(稀釋比:1)
1. 取鮮奶10ml，冷凍離心10分鐘(或放入冰箱10分鐘，離心10分鐘);
2. 除去上層乳脂，待樣品恢復(fù)室溫后，取下層150ul直接測(cè)量;
四、酶標(biāo)檢測(cè)儀測(cè)定生奶中三聚氰胺的方法:
1. 將所有試劑和樣品放回室溫20-28℃，但時(shí)間不要超過24小時(shí);
2. 從鋁箔袋中取出所需數(shù)量的微孔條，固定在微孔板架上，將未使用的微孔條與干燥劑一起放入密封袋中存放;
3.用吸管將150ul標(biāo)準(zhǔn)品和樣品吸入相應(yīng)的微孔。確保每一種溶液都是用干凈的吸管來繪制的，以避免交叉污染。加入每孔加入50ul三聚氰胺酶標(biāo)記物;
4. 輕輕搖動(dòng)盤子60秒，20-28攝氏度孵育30分鐘;
5. 將微孔中的溶液倒入水槽中，將清洗液填滿微孔，搖勻棄去，重復(fù)三次，共洗盤四次;
6. 清洗一次后，將溶液倒進(jìn)孔中，然后翻轉(zhuǎn)微孔板，在吸水紙上輕拍干燥;
7. 每個(gè)微孔加入100ul底物溶液;
8. 20-28℃孵育30分鐘;
9. 每個(gè)微孔加入100ul停止液;
10. 用萊恩德酶測(cè)定標(biāo)儀在450nm下讀板
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